狠狠色丁香婷婷久久综合,天天爽夜夜爽人人爽,欧产日产国产精品精品,欧美日韩精品久久久免费观看

咨詢熱線

15614103871

當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  基于分子雜交技術(shù)的鉤端螺旋體毒力基因組同源性分析

基于分子雜交技術(shù)的鉤端螺旋體毒力基因組同源性分析

更新時(shí)間:2025-02-19      點(diǎn)擊次數(shù):62

摘要

分子雜交技術(shù),對(duì)17株不同毒力的鉤端螺旋體基因組DNA進(jìn)行同源性分析,旨在揭示其毒力差異的分子基礎(chǔ)。通過提取基因組DNA、標(biāo)記探針、雜交及信號(hào)檢測(cè)等步驟,發(fā)現(xiàn)高毒力株與低毒力株在基因組結(jié)構(gòu)上存在顯著差異。研究結(jié)果為鉤端螺旋體毒力機(jī)制研究提供了重要依據(jù)

引言

鉤端螺旋體(Leptospira)是一種重要的人獸共患病原體,其毒力差異與基因組結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。分子雜交技術(shù)作為一種經(jīng)典的基因組分析方法,能夠高效檢測(cè)DNA序列的同源性,廣泛應(yīng)用于病原微生物的毒力基因研究。近年來,隨著鉤端螺旋體全基因組測(cè)序的完成,其毒力相關(guān)基因的功能研究成為熱點(diǎn)。然而,關(guān)于不同毒力株基因組同源性的系統(tǒng)性分析仍較為缺乏。本研究以17株鉤端螺旋體為研究對(duì)象,利用分子雜交技術(shù),探討其基因組同源性及毒力差異的分子機(jī)制,為鉤端螺旋體病的防控提供理論支持。

實(shí)驗(yàn)部分

1. 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 菌株:選取17株鉤端螺旋體,包括高毒力株(如賴型56601株)和低毒力株(如博氏56602株),所有菌株均來自某實(shí)驗(yàn)室保藏。
1.2 試劑:基因組DNA提取試劑盒(某試劑)、digaoxin標(biāo)記試劑盒(某試劑)、雜交緩沖液(某試劑)、顯色底物(某試劑)等。
1.3 儀器:威尼德分子雜交儀、威尼德紫外交聯(lián)儀、威尼德電穿孔儀、離心機(jī)、PCR儀等。

2. 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 基因組DNA提取
采用某試劑盒提取17株鉤端螺旋體的基因組DNA,通過紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度及純度,確保A260/A280比值在1.8-2.0之間。

2.2 探針制備
以高毒力株(賴型56601株)的基因組DNA為模板,采用PCR擴(kuò)增毒力相關(guān)基因片段(如mviN基因),并使用digaoxin標(biāo)記試劑盒進(jìn)行標(biāo)記。

2.3 分子雜交
2.3.1 DNA固定:將17株鉤端螺旋體的基因組DNA分別點(diǎn)在尼龍膜上,使用威尼德紫外交聯(lián)儀進(jìn)行固定。
2.3.2 預(yù)雜交:將尼龍膜置于威尼德分子雜交儀中,加入預(yù)雜交緩沖液,42℃孵育1小時(shí)。
2.3.3 雜交:加入digaoxin標(biāo)記的探針,42℃雜交過夜。
2.3.4 洗膜:依次用低嚴(yán)謹(jǐn)性和高嚴(yán)謹(jǐn)性洗液洗滌尼龍膜,去除未結(jié)合的探針。

2.4 信號(hào)檢測(cè)
將尼龍膜與抗digaoxin抗體孵育,加入顯色底物,觀察并記錄雜交信號(hào)。使用圖像分析軟件對(duì)信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。

3. 數(shù)據(jù)分析

3.1 同源性計(jì)算:根據(jù)雜交信號(hào)強(qiáng)度,計(jì)算各菌株與探針的同源性百分比。
3.2 聚類分析:采用生物信息學(xué)軟件,基于同源性數(shù)據(jù)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,分析菌株間的親緣關(guān)系。

結(jié)果與討論

1. 基因組DNA提取與探針制備

成功提取17株鉤端螺旋體的基因組DNA,濃度均在50-100 ng/μL之間,純度符合實(shí)驗(yàn)要求。PCR擴(kuò)增獲得mviN基因片段,digaoxin標(biāo)記效率達(dá)到90%以上。

2. 分子雜交結(jié)果

雜交信號(hào)顯示,高毒力株(如賴型56601株)與探針的同源性顯著高于低毒力株(如博氏56602株)。其中,賴型56601株的同源性為95%,而博氏56602株的同源性僅為65%。

3. 聚類分析

系統(tǒng)發(fā)育樹顯示,17株鉤端螺旋體可分為兩大簇:高毒力簇和低毒力簇。高毒力簇包括賴型56601株等,低毒力簇包括博氏56602株等。這一結(jié)果與雜交信號(hào)強(qiáng)度分析一致。

4. 討論

本研究通過分子雜交技術(shù),揭示了鉤端螺旋體毒力差異的基因組基礎(chǔ)。高毒力株與低毒力株在毒力相關(guān)基因(如mviN基因)的同源性上存在顯著差異,這可能是其毒力差異的重要原因。此外,聚類分析結(jié)果為進(jìn)一步研究鉤端螺旋體的進(jìn)化關(guān)系提供了重要參考。

結(jié)論

本研究利用分子雜交技術(shù),成功分析了17株鉤端螺旋體基因組DNA的同源性,揭示了高毒力株與低毒力株在基因組結(jié)構(gòu)上的差異。研究結(jié)果為鉤端螺旋體毒力機(jī)制研究提供了新的思路,為其防控策略的制定奠定了理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

1. 董星文, 戴保民, 柴建華. 用分子雜交技術(shù)對(duì)17株鉤端螺旋體基因組DNA同源性的研究[J]. 華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 1992, 01期. 


2. 王中平. 賴型鉤端螺旋體毒力基因mviN的克隆表達(dá)及功能研究[D]. 四川大學(xué), 2007. 


3. 鉤體56602株全基因組測(cè)序及比較基因組分析[D]. 上海交通大學(xué), 2016.

 

4. 問號(hào)鉤端螺旋體毒力基因mviN的表達(dá)及細(xì)胞毒性作用研究[J]. 中國(guó)知網(wǎng), 2023. 


5. 鉤端螺旋體致病相關(guān)基因的鑒定與功能研究[D]. 沈陽藥科大學(xué), 2004. 


狠狠色丁香婷婷久久综合,天天爽夜夜爽人人爽,欧产日产国产精品精品,欧美日韩精品久久久免费观看 少妇人妻偷人精品一区二区| 久久9精品区-无套内射无码| 波多野衣结| 男同桌上课用手指进去了好爽| 在线精品国产一区二区三区| 欧美人与动性XXXXX杂性| 新狼窝色AV性久久久久久| 中文字幕人成乱码熟女| 精品人妻少妇一区二区三区在线| 成人欧美一区二区三区黑人| 国产大屁股喷水视频在线观看| CHINESE国产AVVIDEOXXXX实拍| 精品少妇一区二区三区免费观| 爱福利微拍| 天堂国产一区二区三区| 777米奇色狠狠888俺也去乱| 巜豪妇荡乳3在线播放| 国产成人免费视频| 我和亲妺婷婷在浴室作爱经过| 被黑人猛躁10次高潮视频| 亚洲妇女无套内射精| 国产精品美女久久久久| 久久无码专区国产精品S| 精品无码国产一区二区三区51安| 国产精品久久久久9999| 国内少妇人妻丰满AV| 一进一出又大又粗爽视频| 蜜臀AV国产精品久久久久| 亚洲精品无码午夜福利中文字幕| 强壮的公次次弄得我高视频| 国产70老熟女重口小伙子| GOGO全球大胆高清人体| 少妇与大狼拘作爱视频| 国产96在线 | 亚洲| 人爽人澡人妻A片精品二区| 国产精品国产三级国产A | 99久久人妻无码精品系列| JAPANESEXXXX日本熟妇伦| 爆乳一丝丝不挂裸体大胸美女写真 | 亚洲最大的成人网| 无码性午夜视频在线观看|